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                  常見問題

                  PCR實驗室建設及設計要求


                  就新冠病毒核酸檢測來說,RT-PCR是目前使用最廣泛和較準確的篩選和確認方法。就是通過擴增新冠病毒RNA,通過熒光探針實時檢測擴增產物,這種方法很靈敏,也能夠很好地定量。從目前來看,很多核酸檢測試劑盒的準確率都不錯,而檢測反應的準確程度取決于公布的基因序列的準確程度,以及PCR過程中引物、探針等的設計。下面和博泰小編一起來了解PCR實驗室設計及建設的相關信息吧:

                    

                  一、PCR實驗室布局

                    

                  1、PCR實驗室原則上分為:①試劑準備區;②樣品制備區;③擴增區;④擴增產物分析區,共四個單獨的工作區域。并設有專用走廊,各工作區域應設緩沖間,工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。

                    

                  2、不同功能的工作區應是分隔獨立的,各工作區有明顯的標志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。

                  ① 試劑準備區和樣品制備區為擴增前區;

                  ② 擴增區和擴增產物分析區為為擴增后區,即從:試劑準備區——樣品制備區——PCR擴增室——產物分析室,不得逆向流動。

                    

                  3、實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區,不得逆向流動。

                    

                  4、各工作區的頂部應該安裝紫外燈,紫外燈波長一般為254mm,配置要求為每20㎡一支40W的紫外燈。

                    

                  二、實驗室各區功能及主要設備

                    

                  1、試劑準備區:

                  主要進行試劑的制備,分裝和主反應混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的試劑。本區主要設備有冰箱,天平,離心機,加樣器,振蕩器等。本區對氣流壓力的控制,并沒有嚴格的要求,一般為+10Pa。 

                    

                  2、樣品制備區:

                  主要進行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱,生物安全柜,離心機,加樣器,振蕩器等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染,壓力一般設計為+10Pa。

                    

                  3、擴增區:

                  主要進行DNA擴增項目。已制備的DNA模板(來自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。 本區主要設備有:冰箱,加樣器,離心機,擴增儀等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶從本區漏出,壓力一般設計為-25Pa。

                    

                  4、 擴增產物分析區:

                  主要進行擴增產物的測定。本區主要設備有加樣器,洗板機、酶標儀和水浴箱等。本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域,壓力一般設計為-25Pa。

                    

                  三、PCR實驗室通風系統及壓力控制

                   

                  各區域之間應具備單間的實驗工藝流、氣流、物流與人流,形成單向流程的保護屏障。避免實驗室之間的相互干擾,也防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。 PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴格控制送風、排風的比例,以保證整個實驗區的壓力要求。

                    

                  四、PCR實驗室裝飾

                     

                  實驗室圍護結構應牢固,氣密性好;所有陰陽角宜采用圓弧過度;墻體內壁光潔,不積塵、易清洗、易消毒、耐腐蝕; 地面使用環氧樹脂自流坪或PVC卷材,材料應滿足光潔、耐腐蝕、無縫隙、無滲漏的基本要求。

                    

                  五、PCR實驗室注意事項

                    

                  1、區域大小設置:樣品制備區要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應大一些。而試劑準備區,擴增區,擴增產物分析區,空間可以相對小一些。

                    

                  2、應急裝置配備:試劑準備區,樣品制備區應設緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。

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